平滑肌細胞培養基是一個(gè)基于碳酸氫鹽的緩沖體系，可以在孵育的5%的CO?的氣體環(huán)境下維持一個(gè)圍繞pH7.2的酸堿緩沖體系。本體系是一個(gè)無(wú)菌的液體混合系統，其中包含必須和非必須氨基酸、維生素、激素、生長(cháng)因子、微量元素和一些其他的有機和無(wú)機化合物以及胎牛血清(10%)。
平滑肌細胞培養基SMCM可用于平滑肌細胞增殖實(shí)驗：
以25cm2(50ml)一次性培養瓶培養細胞，細胞在經(jīng)過(guò)消化傳代后明顯較原代胖大，細胞可自行沿一定方向生長(cháng)，表現為峰谷樣圖案。平滑肌細胞隨著(zhù)傳代次數增多，體積會(huì )逐漸增大，突觸明顯并逐漸喪失梭形結構，當細胞生長(cháng)密集時(shí)，擁擠的細胞逐層環(huán)繞，中心可隆起呈結節狀。將酶消化法獲得的細胞傳代至第3代，分別以平滑肌細胞培養基SMCM或含10%新生牛血清的DMEM/F12培養基(10%-F12)進(jìn)行培養，及時(shí)記錄細胞生長(cháng)情況。以每孔2000個(gè)細胞為標準將第3代平滑肌細胞接種于96孔板內，每個(gè)樣本需重復3～4個(gè)輔助測量孔。將96孔板靜置于細胞培養箱內，6小時(shí)后觀(guān)察細胞貼壁、舒展。以每100μl培養基加10μlCCK-8試劑的比例配置混懸劑。清除各待測孔培養基后，每孔加入混懸劑100μl。將96孔板靜置于培養箱內2h后取出，置于微孔板振蕩器上震蕩1min，將96孔板轉至酶標儀，在450nm波長(cháng)下讀取各孔數據并記錄。測量吸光值后的孔不再重復使用。每24h測量一次實(shí)驗孔吸光值，連續測量9天(216h)。觀(guān)察結果。
使用該培養基時(shí)應注意將基礎介質(zhì)儲存在4℃，將SMCGS、FBS和P/S溶液儲存在-20℃。避光保存。
聯(lián)系人：賴(lài)秀麗
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