BD PAXgene Blood RNA Tubes (IVD)
特性符合歐盟IVD指令98/79/EC．
集成的收集、穩定和凈化系統．
RNA在18-25°C下可穩定3天，在- 20°C--70°C下穩定至少96個(gè)月。
分析前的標準樣品處理

BD PAXgene Blood RNA Tubes (IVD)

產(chǎn)品詳細信息

PAXgene血液RNA系統由PAXgene血液RNA管(可從BD，貓。不。762165)用于血液采集、穩定和運輸，PAXgene血液RNA試劑盒用于硅膠膜RNA分離和自旋柱格式的純化。凈化可以手工進(jìn)行，使用微量離心機，或在QIAcube自動(dòng)進(jìn)行。ce - ivd標記管和試劑盒提供精確的性能規格，確保高度可靠的RNA純化。

性能

PAXgene血液RNA管的目的是收集的全血和穩定細胞內RNA長(cháng)達3天的年齡在18歲至25歲之間°C(見(jiàn)圖“RNA穩定°C:年齡在18歲至25歲之間的安全系數"和“RNA穩定°C:年齡在18歲至25歲之間IL1B")或5天2 - 8°C(見(jiàn)圖“RNA穩定在2 - 8°C:安全系數"和“RNA穩定在2 - 8°C: IL1B")。目前可用的數據顯示，細胞RNA在-20°C或-70°C下至少可以穩定96個(gè)月。

使用PAXgene Blood RNA System純化的總RNA純度高，A260/A280值在1.8 - 2.2之間，≤1.0% (w/w)基因組DNA。當使用高達30%的洗脫液時(shí)，至少95%的樣品在RT-PCR中沒(méi)有顯示抑制作用。

平均樣品制備時(shí)間(基于12個(gè)樣品制備的數據)約為90分鐘，只有40分鐘的動(dòng)手時(shí)間。在處理過(guò)的樣本中，≥95%的2.5 ml健康人全血的RNA產(chǎn)量≥3µg。由于產(chǎn)量高度依賴(lài)于捐助者，個(gè)別產(chǎn)量可能有所不同。個(gè)人捐贈者,PAXgene血液RNA系統提供高度可再生的和可重復的收益率(見(jiàn)圖“可再生的和可重復的RNA凈化"和“重復性和再現性的RNA收益率")和可重復的和可重復的rt - pcr(見(jiàn)圖“用戶(hù)之間的重現性"和“再現性工具包之間很多",和表格)，使其在臨床診斷測試中非?？煽?。

經(jīng)處理的樣本中，≥95%的2.5 ml健康人全血的RNA產(chǎn)量≥3 μg。圖“RNA產(chǎn)率和純度-自動(dòng)化處理"表示的是由3個(gè)操作員使用3個(gè)試劑盒批次的自動(dòng)化方案制備的共288個(gè)樣品的RNA產(chǎn)率。由于這些研究使用的是匯集的血液樣本，而不是單獨的PAXgene血液RNA管，因此結果不能反映單個(gè)血樣的RNA產(chǎn)量。由于產(chǎn)量高度依賴(lài)于捐助者，個(gè)別產(chǎn)量可能有所不同。

當使用高達30%的洗脫液時(shí)，至少95%的樣品在RT-PCR中沒(méi)有顯示抑制作用。使用自動(dòng)化程序，通過(guò)定量、實(shí)時(shí)RT-PCR檢測rna陰性樣本(水)和rna陽(yáng)性樣本(人類(lèi)全血)的β -球蛋白和FOS轉錄本序列，無(wú)法檢測樣品之間的交叉污染。

用PAXgene血RNA系統純化的RNA和自動(dòng)化的協(xié)議是高純度的，因為缺乏RT-PCR抑制(見(jiàn)上文)和A260/A280值在1.8和2.2之間。通過(guò)對β -肌動(dòng)蛋白基因序列的實(shí)時(shí)定量PCR檢測，在≥95%的樣本中，基因組DNA含量≤1% (w/w)。圖“RNA產(chǎn)量和純度-自動(dòng)化處理"顯示了使用3個(gè)試劑盒批次的自動(dòng)化方法制備的共288個(gè)樣品的A260/A280值和相對基因組DNA。

使用PAXgene血RNA系統的RNA純化自動(dòng)化方案提供了高重復性和可重復性的RT-PCR結果，如圖“自動(dòng)和手動(dòng)方案之間的重現性"所示，這使得它在臨床診斷測試中非?？煽?/span>。

過(guò)程

PAXgene Blood RNA程序簡(jiǎn)單，可以使用手動(dòng)或自動(dòng)程序進(jìn)行(見(jiàn)流程圖“手動(dòng)PAXgene Blood RNA程序"和“自動(dòng)PAXgene Blood RNA程序")。

手動(dòng)PAXgene血液RNA程序

將重懸的顆粒與蛋白酶K一起孵育在優(yōu)化的緩沖液中，以實(shí)現蛋白質(zhì)消化。通過(guò)PAXgene Shredder旋轉柱進(jìn)行額外的離心，使細胞裂解液均質(zhì)并清除殘留的細胞碎片，并將流過(guò)部分的上清液轉移到新鮮的微型離心管中。加入乙醇調節結合條件，將裂解液應用于PAXgene RNA自旋柱。在一個(gè)簡(jiǎn)短的離心過(guò)程中，當污染物通過(guò)時(shí)，RNA被選擇性地結合到PAXgene硅膜上。在幾個(gè)有效的清洗步驟中去除剩余的污染物。在第一和第二沖洗步驟之間，用DNase I處理膜以去除微量的結合DNA。洗滌步驟結束后，RNA在洗脫緩沖液中洗脫并熱變性。

全自動(dòng)PAXgene血液RNA程序

QIAcube全自動(dòng)樣品制備，遵循與手動(dòng)程序相同的步驟，使您可以繼續使用PAXgene血液RNA試劑盒純化高質(zhì)量的RNA。

自動(dòng)RNA純化協(xié)議包括兩部分(或協(xié)議)，“PAXgene Blood RNA Part A"和“PAXgene Blood RNA Part B"，在這兩部分之間有一個(gè)簡(jiǎn)短的人工干預。

將離心、洗滌、重懸的核酸顆粒從PAXgene Blood RNA Tube轉移到加工管中，加工管放置在QIAcube工作臺上的熱搖器單元中。操作者從菜單中選擇并啟動(dòng)“PAXgene Blood RNA Part A"協(xié)議。QIAcube完成了在洗脫緩沖液中進(jìn)行RNA洗脫的步驟。操作人員將含有純化RNA的微離心管轉移到QIAcube的熱激器單元中。操作者從菜單中選擇并啟動(dòng)“PAXgene Blood RNA Part B"協(xié)議，QIAcube進(jìn)行熱變性。

平均樣品制備時(shí)間(基于12個(gè)樣品制備的數據)是125分鐘，只有大約20分鐘的動(dòng)手時(shí)間。

BD PAXgene Blood RNA Tubes (IVD)應用程序

當該試劑盒與PAXgene血液RNA管一起使用時(shí)，該系統提供全血的細胞內RNA用于分子診斷檢測的RT-PCR。